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初級(jí)檢驗(yàn)技士考試輔導(dǎo):瑞氏染色法

更新時(shí)間:2009-12-22 11:02:06 來源:|0 瀏覽0收藏0

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  初級(jí)檢驗(yàn)技士考試輔導(dǎo):瑞氏染色法

  瑞氏染色法是臨床上最常用的染色方法。

  1.瑞氏染料

  由酸性染料伊紅(E-)和堿性染料亞甲藍(lán)(M+)組成。伊紅通常為鈉鹽,有色部分為陰離子。亞甲藍(lán)(又名美藍(lán))為四甲基硫堇染料,有對醌型和鄰醌型兩種結(jié)構(gòu)。通常為氯鹽,即氯化美藍(lán),有色部分為陽離子。美藍(lán)容易氧化為一、二、三甲基硫堇等次級(jí)染料(即天青)。將適量伊紅、美藍(lán)溶解在甲醇中,即為瑞氏染料。甲醇的作用:一是溶解美藍(lán)和伊紅;二是固定細(xì)胞形態(tài)。

  2.染色原理

  既有物理的吸附作用,又有化學(xué)的親和作用。各種細(xì)胞成分化學(xué)性質(zhì)不同,對各種染料的親和力也不一樣。如血紅蛋白、嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì),與酸性染料伊紅結(jié)合,染粉紅色,稱為嗜酸性物質(zhì);細(xì)胞核蛋白、淋巴細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞胞質(zhì)為酸性,與堿性染料美藍(lán)或天青結(jié)合,染紫藍(lán)色或藍(lán)色,稱為嗜堿性物質(zhì);中性顆粒呈等電狀態(tài)與伊紅和美藍(lán)均可結(jié)合,染淡紫紅色,稱為嗜中性物質(zhì)、原始紅細(xì)胞、早幼紅細(xì)胞胞質(zhì)、核仁含較多酸性物質(zhì),染成較濃厚的藍(lán)色;中幼紅細(xì)胞既含酸性物質(zhì),又含堿性物質(zhì),染成紅藍(lán)色或灰紅色;完全成熟紅細(xì)胞,酸性物質(zhì)徹底消失后,染成粉紅色。

  3.pH的影響 (pH6.4~pH6.8)  環(huán)球網(wǎng)校

  細(xì)胞各種成分均屬蛋白質(zhì),因蛋白質(zhì)系兩性電解質(zhì),所帶電荷隨溶液pH而定,在偏酸性環(huán)境中正電荷增多,易與伊紅結(jié)合,紅細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞染色偏紅,細(xì)胞核呈淡藍(lán)色或不染色;在偏堿性環(huán)境中負(fù)電荷增多,易與美藍(lán)結(jié)合,所有細(xì)胞呈灰藍(lán)色,顆粒呈深暗,嗜酸性顆粒呈暗褐,甚至棕黑色,中性顆粒偏粗,呈紫黑色。稀釋染液必須用緩沖液,沖洗用水應(yīng)近中性,否則可導(dǎo)致細(xì)胞染色呈色異常,形態(tài)難以識(shí)別,甚至錯(cuò)誤。

  4.染色方法和注意事項(xiàng)  環(huán)球網(wǎng)校

  (1)血涂片干透后固定,否則細(xì)胞在染色過程中容易脫落。

  (2)沖洗時(shí)應(yīng)以流水沖洗,不能先倒掉染液,以防染料沉著在血涂片上。沖洗時(shí)間不能過久,以防脫色。如血涂片上有染料顆粒沉積,可滴加甲醇,然后立即用流水沖洗。

  (3)染色過淡可以復(fù)染,復(fù)染時(shí)應(yīng)先加緩沖液,然后加染液。染色過深可用流水沖洗或浸泡,也可用甲醇脫色。

  (4)瑞氏染色Ⅰ液由瑞氏染料、甲醇(AR級(jí)以上)和甘油組成,Ⅱ液為磷酸鹽緩沖液(pH6.4~pH6.8)。

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