檢驗主管技師考試輔導(dǎo)：細胞染色

　　檢驗主管技師考試輔導(dǎo)：細胞染色

    　一).瑞特(Wright)染色法 ：為發(fā)觀察細胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)，識別各種細胞及其異常變化，血涂片必須嘲行染色。血涂片的各種染色方法大多是羅氏染色法衍變來的。目前常用瑞特染色法。

　　(1)瑞特染料是由酸性染料伊紅和堿性染料亞甲藍組成有復(fù)合染料。亞甲藍為四甲基硫堇染料，有對醌型和鄰醌型兩種結(jié)構(gòu)。通常為氯鹽，即氯化美藍。美藍容易氧化為一、二、三甲基硫堇等次級染料。市售美藍中部分已被氧化為天青。伊紅通常為鈉鹽。即伊紅和伊混合后，產(chǎn)生一種憎液性膠體伊紅美藍中性沉淀，即瑞特染料。

　　(2)細胞的染色既有物理的吸附作用，又有化學(xué)的親和作用，各種細胞成分化學(xué)性質(zhì)不同，對各種染料的親和力也不一樣。因此，用本染料液染色后，在同一血片上，可以看到各種不同的色彩，例如血紅蛋白，嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì)，與酸性染料伊紅結(jié)果，染粉紅色，稱為嗜酸性物質(zhì);細胞核蛋白和淋巴細胞胞漿為酸性，與堿性染料美藍或天青結(jié)合，染紫藍色，稱為嗜堿性物質(zhì);中性顆粒呈等電狀態(tài)與伊紅和美藍均可結(jié)合，染淡紫色，稱為中性物質(zhì)。

　　(3)PH對細胞染色有影響。細胞各種成分均不蛋白質(zhì)，由于蛋白質(zhì)系兩性電解質(zhì)，所帶電荷隨溶液PH而定，在偏酸性環(huán)境中下在電荷增多，易與伊紅結(jié)合，染色偏紅;在偏三性環(huán)境中負電荷增多，易與美藍或天青結(jié)合，染色 偏藍。因此細胞染色對氫離子濃度十分敏感，染色用正經(jīng)片必須清潔，無酸堿污染。配制頊特液必須用優(yōu)質(zhì)甲醇，稀釋染色必須用緩沖液，沖洗用水應(yīng)近中性，否則可導(dǎo)致各種細胞染色反應(yīng)異常，以致識別困難，甚至造成錯誤。

　　新鮮配制的染料偏堿，須在室溫或是37℃下貯存一定時間，待染料成熟，主要是美藍逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)樘烨郆后才能使用，貯存時愈久，染色效果愈好。EAM GILLILAND等采用吸光度比值作為頊特染液的質(zhì)量規(guī)格。rA測定方法如下：取瑞特染液15-25μl(視染液濃度而定)，加甲醇10ml稀釋，混勻后以甲醇為空折管，分別以波長650nm和25nm比色。Ra=a650/a525.因為美藍吸收峰小組長為650nm，伊紅吸收峰波長為525nm ;天青B吸收峰也為650nm但吸光度A約為美藍的一半。所以新配染料rA接近2，隨著美藍逐漸氧化為天青B，RA也相應(yīng)下降。RA下降到1.3±0.1時即可使用。瑞特染液貯存過程中，必須塞嚴，以防止甲醇揮發(fā)和被氧化成甲酸。有人主張在配方中加入甘油30ml，防止甲醇揮發(fā)，關(guān)可合細胞染色清晰。甲醇必須純凈，如甲醇中丙酮含量過多，染色偏酸，使白細胞著色不良。

　　二).吉姆薩(Giemsa)染色法 ：吉姆薩染液由天青，伊紅組成。染色原理和結(jié)果與瑞特染色法基本相同。但本法對細胞核和寄生蟲著色較好，結(jié)構(gòu)顯示更不清晰，而胞質(zhì)和中性顆粒則著色較差。為兼顧二者之長，可用復(fù)合染色法。即以稀釋吉姆薩液代替緩沖液，按瑞特染色法染10min。或先用瑞特染色法染色后，再用稀釋吉姆薩復(fù)染。

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