初級檢驗(yàn)技士輔導(dǎo)：立克次體及檢驗(yàn)(4)

　　初級檢驗(yàn)技士輔導(dǎo)：立克次體及檢驗(yàn)(4)$lesson$

　　微生物檢驗(yàn)

　　(一)標(biāo)本的采集和處理(熟悉)

　　1、病人血液標(biāo)本：發(fā)熱初期或急性期交易檢出病原體。在病程第1周內(nèi)并在用抗生素前采血，立即床側(cè)接種。

　　血清學(xué)檢查一般采集3份血液標(biāo)本，分別取自病程早期、病后10-14天及病后21-28天。如患者已使用抗生素治療，因抗體產(chǎn)生較晚，需采集4份標(biāo)本。

　　2、活檢或尸體材料：肺、肝、脾等組織標(biāo)本研磨制成懸液，離心取上清液接種，有細(xì)菌污染時加青霉素置室溫作用30分鐘后街終于動物。

　　(二)標(biāo)本直接檢查(熟悉)

　　1、立克次體的染色法：多用于臟器標(biāo)本的檢查。固定后用熒光抗體染色或常規(guī)染色鏡檢。必要時做切片檢查，標(biāo)本片薄而均勻，組織結(jié)構(gòu)清晰，常見脾、肺及心瓣膜中有立克次體，也可在肝、腎及皮疹活檢組織中檢出。

　　2、核酸檢測：針對特異性抗原基因的序列設(shè)計(jì)引物，采用PCR技術(shù)和核酸探針檢測。

　　(三)立克次體培養(yǎng)法(熟悉)

　　1、立克次體分離：班疹傷寒、斑點(diǎn)熱、恙蟲病和Q熱病原體分離多用動物接種。常用動物有豚鼠、金黃地鼠、小白鼠、大白鼠及家兔等。漢賽巴通體用人工培養(yǎng)基，埃立克體用細(xì)胞培養(yǎng)。

　　2、分離株的大量繁殖及保存用雞胚卵黃囊培養(yǎng)或細(xì)胞培養(yǎng)。

　　(四)血清學(xué)試驗(yàn)(掌握)

　　血清學(xué)試驗(yàn)是研究立克次體的重要方法，也是立克次體病實(shí)驗(yàn)診斷和鑒定病原體的重要手段?；颊唠p份血清的試驗(yàn)結(jié)果，有利于立克次體病現(xiàn)癥診斷。

　　1、間接免疫熒光試驗(yàn)、ELISA間接法：是目前檢測標(biāo)本中特異性抗體的常用方法。

　　單份血清滴度≥1：128者有現(xiàn)癥診斷意義，一般滴度在1：16或以上即為陽性，4倍增長可作為立克次體病的現(xiàn)癥診斷。

　　補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)雖特異，但敏感性不如間接免疫熒光和ELISA，且操作繁瑣，除Q熱診斷外，多被前兩者取代。

　　2、凝集試驗(yàn)：分為特異性凝集和非特異性凝集試驗(yàn)兩種。

　　(1)特異性凝集試驗(yàn)：微量凝集(MA)試驗(yàn)、間接血凝(IHA)、膠乳凝集(LA)試驗(yàn)

　　MA以血清最高稀釋度呈凝集者為其滴度，達(dá)1：8以上者為陽性。IHA滴度在1：50以上有診斷價(jià)值。LA結(jié)果與IHA結(jié)果相吻合。

　　(2)非特異性凝集試驗(yàn)：

　　外斐試驗(yàn)常用于立克次體屬的三個生物型的診斷，缺乏敏感性和特異性。本試驗(yàn)除Q熱、立克次體痘及漢賽巴通體感染為陰性外，其他為陽性結(jié)果。

　　一般血清滴度達(dá)1：160即為陽性，病程中雙份或多份血清試驗(yàn)，至少效價(jià)有4倍增長才有診斷意義。

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