2012年初級檢驗技士免疫檢驗：HLA抗體的臨床意義及檢測技術(shù)的研究進(jìn)展

　　1 與器官移植的關(guān)系：

　　許多資料表明，HLA抗體可以導(dǎo)致針對移植物的免疫反應(yīng)而發(fā)生超急排和加速性排斥反應(yīng)，使移植失敗或降低移植物存活率。在器官移植中，供受雙方的HLA相容性越大，移植成功率越高。最近一項國際合作的研究結(jié)果顯示，對36個移植中心的4763例器官移植患者檢測HLA抗體，腎移植HLA抗體檢出率是20. 9%，肝移植19. 3%，心臟移植22. 8%，肺臟移植14.2%.另一項在23個腎移植中心開展的檢測HLA抗體預(yù)測移植1年內(nèi)失敗頻率的研究中， 2278例腎移植病人中有HLA抗體的移植失敗率為6. 6% ; 1778無HLA抗體的病人移植失敗率為3. 3%.結(jié)果顯示有HLA抗體移植病人的失敗率明顯高于無抗體的病人。另外HLA抗體的濃度與移植存活密切相關(guān)。M o n te iro等對124例腎移植患者隨訪發(fā)現(xiàn)，術(shù)后PRA(群體反應(yīng)性抗體)> 50%的患者中85%需透析，PRA 10%的患者移植腎喪失的幾率是PRA< 10%患者的3倍。國內(nèi)外研究者一致認(rèn)為移植前受者體內(nèi)PRA水平的檢測對于是否發(fā)生移植排斥反應(yīng)有著顯著影響 2 ，移植后受者體內(nèi)PRA水平對于移植物存活率的高低，移植轉(zhuǎn)歸以及移植后的器官功能都有著重要作用 3 .最新資料顯示HLA抗體是引起急排的始動因素，HLA-I類抗體出現(xiàn)后平均約634d移植失敗，HLA-II類抗體出現(xiàn)后平均約1503d移植失敗，病人體內(nèi)可清楚檢測到供者的特異性抗體 4 .隨著檢測HLA抗體方法的靈敏度的進(jìn)一步提高，移植失敗患者體內(nèi)HLA抗體的檢出率上升到95% 5 ，幾乎所有的移植排斥均可檢測到HLA抗體。 中 華 考 試 網(wǎng)

　　2 與輸血的關(guān)系：

　　HLA抗原存在于所有的有核細(xì)胞，在淋巴細(xì)胞上的密度最高，幼稚紅細(xì)胞和血小板都帶有HLA抗原。因此在輸注全血，紅細(xì)胞懸液，粒細(xì)胞，血小板等血液成分時都有可能發(fā)生因HLA抗原型不同而引起的各類非溶血性輸血反應(yīng)，影響輸血治療的效果。盡管現(xiàn)在使用了白細(xì)胞濾器，全血或紅細(xì)胞懸液輸注的非溶血性輸血反應(yīng)得到有效的控制，但粒細(xì)胞和血小板的輸注依然存在問題。大多數(shù)發(fā)熱反應(yīng)與多次輸入HLA不相合的白細(xì)胞，血小板有關(guān)。有資料顯示發(fā)熱反應(yīng)患者的微量淋巴細(xì)胞毒反應(yīng)多數(shù)呈陽性，輸血次數(shù)與陽性反應(yīng)發(fā)生率呈平行關(guān)系。由于多次接受HLA不相合的白細(xì)胞，血小板，受血者血中產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，再次接受輸血時，發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，激活補(bǔ)體，進(jìn)一步引起白細(xì)胞，血小板溶解而釋放熱源，導(dǎo)致發(fā)熱反應(yīng)。同時由于個體間差異能激發(fā)產(chǎn)生同種抗體，也可引起發(fā)熱反應(yīng)。對于血小板輸注而言，給具有HLA抗體的患者輸注血小板，抗體可與輸入的血小板反應(yīng)，造成血小板輸注無效。

　　3 與妊娠的關(guān)系：

　　妊娠婦女由于母胎HLA不合或輸血免疫反應(yīng)可以產(chǎn)生白細(xì)胞抗體，抗體隨著妊娠次數(shù)的增加而相應(yīng)增高。這種HLA抗體屬于IgG，可以通過胎盤，使胎兒產(chǎn)生同種免疫性中性粒細(xì)胞減少癥及同種免疫性血小板減少性紫癜。現(xiàn)代免疫學(xué)認(rèn)為，母胎HLA相容性越大，母體就不能識別胚胎抗原，就不能產(chǎn)生封閉抗體，胚胎得不到封閉抗體的保護(hù)而遭排斥，即產(chǎn)生病理性妊娠。有資料表明HLA抗體與病理性妊娠如流產(chǎn)，不孕，妊高癥和早產(chǎn)等均有一定關(guān)系 6 .胡興等進(jìn)一步證實妊高癥組HLA抗體在顯著低于對照組，尤其以HLA-II類抗體的下降更為顯著，這說明HLA抗體，尤其是HLA-II類抗體的下降或缺乏在妊高癥的發(fā)病及病情進(jìn)展中有著重要的作用 7 ，國外也有類似報道

　　4 .HLA抗體的檢測方法

　　1）微量淋巴細(xì)胞毒實驗(CDC)：該實驗是由美國洛杉磯加州大學(xué)的Pau l.T e ra sak i教授于1964年創(chuàng)建。主要原理是淋巴細(xì)胞具有HLA抗原，HLA抗體能結(jié)合到帶有相應(yīng)抗原的淋巴細(xì)胞膜上，補(bǔ)體可以結(jié)合并在淋巴細(xì)胞膜上使其死亡。如果淋巴細(xì)胞不帶有相應(yīng)的抗原，則無此作用。通過染色來觀察細(xì)胞是否死亡來確定相應(yīng)的抗原或抗體。該方法可迅速檢測患者的HLA抗體，但需要分離細(xì)胞，抗原用量大且敏感性不高，多年來在臨床廣泛應(yīng)用。

　　2） 酶聯(lián)免疫法(EL ISA)：該實驗的基本原理是將HLA抗原包被在一個孔內(nèi)，將患者血清加入孔中與孔內(nèi)的HLA抗原反應(yīng)，通過酶作用使其顯色，用熒光儀根據(jù)吸收光的不同來判斷結(jié)果。這種方法無需分離細(xì)胞，敏感性也有所提高，無需專門儀器設(shè)備，同時可檢出HLA-I類和HLA-II類抗體。但該方法操作繁瑣，也較費時，一次只能檢測一個指標(biāo)，因此臨床應(yīng)用受到一定限制。

　　3） 流式細(xì)胞儀法(F lowCy tom e t ry)及單抗原磁珠法(L um inexTMF lowCy tom e t ry)：這兩種方法的基本原理323陜西醫(yī)學(xué)雜志2005年3月第35卷第3期都是將HLA單價抗原包被在不同顏色的微磁珠表面，用被檢測血清與磁珠反應(yīng)，血清中HLA特異性抗體便與包被在磁珠上的抗原結(jié)合，然后再與標(biāo)記PE的二抗孵育。根據(jù)熒光強(qiáng)弱通過流式細(xì)胞儀檢測出與這些磁珠對應(yīng)的HLA抗體。這兩種方法在酶聯(lián)免疫法的基礎(chǔ)上使敏感性明顯提高，排除其它非反應(yīng)抗原的干擾，可準(zhǔn)確確定HLA抗體的特異性。單抗原磁珠法(L um inexTMF lowCy tom e t ry)在普通流式細(xì)胞儀基礎(chǔ)上進(jìn)一步改進(jìn)，并通過分析軟件的更新，對于較弱的反應(yīng)抗體也能準(zhǔn)確檢出。

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