2013微生物與寄生蟲檢驗:細菌感染的分子生物學檢測
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(一)常用的分子生物學技術
1.核酸雜交 常用的雜交技術有:斑點雜交、southern印跡、原位雜交、Northern印跡等。探針的種類有全染色體DNA探針、染色體克隆片段DNA探針、質(zhì)粒DNA探針、rRNA基因探針、寡核苷酸探針等。
2.核酸擴增技術 核酸擴增技術是分子生物學中最具有重大意義的技術之一。對核酸進行擴增的方法很多,如聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction ,PCR)、連接酶鏈反應、自保留序列擴增及Q-beta擴增等。以聚合酶鏈反應最為廣泛應用。
PCR技術在細菌的快速檢測、細菌的毒素基因檢測、細菌的耐藥性檢測及感染細菌的流行病學調(diào)查中得到日益廣泛的應用。
生物芯片是新近發(fā)展的一項對基因、蛋白質(zhì)、細胞及其他生物組分進行大信息量分析的檢測技術。常用的有基因芯片(gene chips)和蛋白芯片(protein chips)。目前正在研制和評價中。
(二)鑒定感染細菌種屬的方法
1.細菌種屬的鑒定
DNA堿基組成的測定 G+C mol%含量不同的細菌,為不同種細菌;含量相同的可能為不同種的細菌。細菌的G+C mol%相當穩(wěn)定,不受培養(yǎng)條件、菌齡和其他外界因素影響。最常用的方法是熱變性法。
DNA-DNA雜交 DNA雜交可得出DNA之間核苷酸順序的互補程度,從而推斷不同細菌基因組間的同源性。
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