血管性血友病的實驗室檢查

　　實驗室檢查對vWD的診斷、分型和鑒別診斷十分重要。常用的實驗室檢查有出血時間、因子Ⅷ：C、vWF：Ag，瑞斯托霉素誘導的血小板聚集、瑞斯托霉素輔因子活性(vWF：Ricof)測定、凝膠電泳多聚體分析。凝血檢查篩選試驗中外源途徑實驗檢查正常，內(nèi)源途徑篩選試驗可以延長，但那些第Ⅷ因子水平接近正常的患者可以正常。

　　一、出血時間

　　出血時間有2種方法測定，即Duke法和Ivy法(或Ivy改良法)。Duke法方法簡便常用，但不敏感，一些vWD患者Duke法出血時間正常而Ivy出血時間延長。因此考慮vWD診斷時盡量采用Ivy改良法。另外在替代治療時，Duke法出血時間比Ivy法容易糾正。但接受足量替代治療使Duke出血時間正常但Ivy出血時間仍延長的患者手術(shù)中并沒有發(fā)生過量的出血。有些1型vWD患者Ivy出血時間可以正常，而其他實驗室檢查可以異常。2型vWD及3型vWD一般均延長但2N型常正常。雖然出血時間不應(yīng)當作為vWD的常規(guī)篩選試驗，但在一些特定患者與其他檢查結(jié)合及治療的監(jiān)測方面仍有價值。

　　二、Ⅷ：C測定

　　有2種測定方法，即建立在部分凝血活酶時間基礎(chǔ)上的一期法和建立在凝血活酶生成試驗基礎(chǔ)上的二期法。一期法較簡便，為多數(shù)實驗室采用。Ⅷ：C水平在vWD變化較大，1型患者可以正常，但大多數(shù)病例降低，一般為正常水平10%～40%.2型可以減少也可以正常，但是2N型顯著減少。3型顯著減少與重型中間型甲型血友病相似，一般均少于10%。

　　三、vW因子抗原(vWF：Ag)

　　血漿vWF：Ag可用免疫電泳、放射免疫法，或ELISA法加以測定。Laurell免疫電泳測定依靠vWF：Ag在含抗體瓊脂板上的抗原抗體沉淀，除與vWF：Ag量有關(guān)外，與vWF：Ag的遷移率有關(guān)。在1型中其結(jié)果常與瑞斯托霉素輔因子活性相平行。但在變異型雖然缺少大分子量vWF多聚體，但測定水平可正常，這與小分子量多聚體遷移率較快也有關(guān)系，3型患者免疫電泳法測定常無沉淀線形成。放射免疫法和ELISA法結(jié)果更正確敏感。

　　四、瑞斯托霉素誘導的血小板聚集(RIPA)

　　將瑞斯托霉素加入正常富含血小板血漿中導致血小板聚集。這與血漿vWF和血小板有關(guān)。在vWD約65%患者聚集的量和聚集率降低。測定中應(yīng)注意使用不同濃度的瑞斯托霉素。低濃度瑞斯托霉素時出現(xiàn)高血小板聚集表明vWF的異?；蜓“宓漠惓?。2B型vWD和血小板型假vWD患者，0.2～0.7mg/ml瑞斯托霉素濃度可以使其富含血小板血漿聚集，有時在不加瑞斯托霉素情況下可以出現(xiàn)自發(fā)性聚集。正常人富含血小板血漿在此種濃度下不會聚集。1.0～1.2mg/ml為常用的濃度。高于1.2mg/ml常使1型vWD富含血小板血漿的聚集正常。

　　五、vWF瑞斯托霉素輔因子活性(vWF：Ricof)

　　定量測定血漿vWF在瑞斯托霉素存在時使血小板聚集的能力。使用正常洗滌無vWF血小板或福爾馬林固定血小板。正常人血漿vWF：Ricof為50%～150%.本法結(jié)果與RIPA意義相同但比RIPA更敏感，特異性重復(fù)性更高。在1型vWD一般降低，也可正常。2A型和2M型顯著降低，2N型正常，2B型升高，3型極低。

　　Botrocetin是一種蝰蛇毒，在vWF存在時可使血小板聚集，也可代替瑞斯托霉素用于測定vWF輔因子的活性。但在缺少大分子量vWF多聚體的2型vWD，所測得的vWF輔因子活性高于用瑞斯托霉素。

　　六、瓊脂糖凝膠電泳多聚體分析

　　血漿vWF和血小板vWF，在SDS瓊脂糖凝膠電泳時vWF多聚體在分子量大小的基礎(chǔ)上分離，大分子量多聚體移動最慢，中分子量多聚體較快，小分子量多聚體最快。多聚體可用放射自顯影或酶標技術(shù)顯示。在收集標本和實驗過程中應(yīng)注意加入蛋白酶抑制劑。正常多聚體圖形大、中、小分子量多聚體均存在，醫(yī)|學教育網(wǎng)搜集整理可觀察到1條主帶和2條或4條衛(wèi)星帶。血小板中可有比血漿更大分子量多聚體成分。多聚體分析在vWF分型中起著重要作用。1型vWD大、中、小分子量多聚體均存在，自顯影比正常對照淺，示vWF量均勻減少。3型無多聚體出現(xiàn)。2型vWD多聚體圖形異常變化多，可表現(xiàn)為大、中分子量多聚體缺如，衛(wèi)星帶消失等多種異常類型，是以前Ⅱ型亞型分類的重要依據(jù)。