2014主管檢驗(yàn)技師考試輔導(dǎo):總蛋白定量測(cè)定
總蛋白定量測(cè)定是醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)主管技師考試需要了解的知識(shí)點(diǎn),環(huán)球網(wǎng)校小編搜集整理了相關(guān)內(nèi)容,希望對(duì)廣大復(fù)習(xí)備考的考生有所幫助。
1、原理
磺基水楊酸為生物堿試劑,能沉淀蛋白質(zhì),但對(duì)白蛋白的沉淀能力比球蛋白強(qiáng),加適量硫酸鈉后,沉淀白、球蛋白的能力趨于一致,與標(biāo)準(zhǔn)蛋白濁度對(duì)比進(jìn)行定量測(cè)定。
2、試劑
磺基水楊酸~硫酸鈉試劑(SS~S)
磺基水楊酸3.0g
無(wú)水硫酸鈉7.0g
蒸餾水加至100ml
過(guò)濾后,儲(chǔ)存于棕色瓶中,如顯色或混濁則不能用。
3、方法
(1)制備標(biāo)準(zhǔn)曲線含蛋白200、400、800、1200、1600mg/L的稀釋混合人血清標(biāo)準(zhǔn)系列各0.5ml,加SS~S試劑4.5ml,充分混勻,7~15分鐘后,用420nm波長(zhǎng)比濁,以吸光度為縱坐標(biāo),蛋白質(zhì)濃度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
(2)樣品檢測(cè)取待測(cè)腦脊液標(biāo)本各0.5ml于兩只試管中,其中一只試
管加SS~S試劑4.5ml,另一試管加154mmol/L的NaCl溶液4.5ml作為標(biāo)本空白管。在與標(biāo)準(zhǔn)曲線相同的條件下比濁,所得得吸光度可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上求得蛋白質(zhì)濃度。
4、注意事項(xiàng)
(1)腦脊液如有多量細(xì)胞或混濁,應(yīng)先離心以除去。如蛋白質(zhì)濃度過(guò)高,應(yīng)先行用生理鹽水稀釋后重新測(cè)定。
(2)加入SS~S試劑的操作手法和速度、室溫及比濁前的放置時(shí)間都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。故操作時(shí)應(yīng)注意控制加入試劑的方式和比濁時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)管一致。應(yīng)隨氣溫改變,勤作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
5、正常參考值
腰穿CSF蛋白含量:0.2~0.4g/L池穿CSF蛋白含量:0.1~0.25g/L
側(cè)腦室穿刺CSF蛋白含量:0.05~0.15g/L
腦脊液蛋白質(zhì)含量與年齡成正比,兒童含量較低,成人稍高,老年人又比成年人高。
6、臨床意義
腦脊液蛋白質(zhì)含量增高,為血腦屏障被破壞的標(biāo)志。頗受臨床工作者的重視。
蛋白質(zhì)含量增高常見(jiàn)于下列情況:
(1)中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥。腦部感染時(shí),腦膜和脈絡(luò)叢毛細(xì)血管通透性增加,蛋白質(zhì)分子容易透過(guò),首先是白蛋白增高,隨后是球蛋白和纖維蛋白增高。
(2)神經(jīng)根病變。如急性感染性多發(fā)性神經(jīng)炎(Guillain~Barre綜合征),多數(shù)病例有蛋白質(zhì)增高,而細(xì)胞數(shù)正?;蚪咏?,即蛋白~細(xì)胞分離現(xiàn)象。
(3)椎管內(nèi)梗阻。腦與蛛網(wǎng)膜下腔互不相通,血漿蛋白由脊髓中的靜脈滲出,CSF蛋白質(zhì)含量顯著增高,有時(shí)高達(dá)30~50g/L,這時(shí)CSF變黃,可自行凝固。如脊髓腫瘤、轉(zhuǎn)移癌、粘連性蛛網(wǎng)膜炎等。此外,早產(chǎn)兒CSF蛋白含量可達(dá)2g/L,新生兒為0.8~1.0g/L,出生兩個(gè)月后逐漸降至正常水平。
含血的CSF蛋白質(zhì)含量增高。為了鑒別原來(lái)有無(wú)蛋白質(zhì)增高,可用每升紅細(xì)胞700×106個(gè)約相當(dāng)增加蛋白質(zhì)量0.01g/L來(lái)推算,用含血CSF的蛋白質(zhì)含量減去含紅細(xì)胞數(shù)折算成的蛋白質(zhì)含量,即為原來(lái)CSF的蛋白質(zhì)含量。
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