2014檢驗(yàn)技師考試輔導(dǎo):酶免疫技術(shù)的分類
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酶免疫技術(shù)一般分成酶免疫組化技術(shù)和酶免疫測(cè)定兩大類。酶免疫組化技術(shù)與熒光抗體技術(shù)相似,酶標(biāo)記抗體與組織切片上的抗原起反應(yīng),然后與酶底物作用,形成有色沉淀物,可以在普通光學(xué)顯微鏡下觀察。如酶作用的產(chǎn)物電子密度發(fā)生一定的改變,則可用電子顯微鏡觀察,稱為酶免疫電鏡技術(shù)。
酶免疫測(cè)定根據(jù)抗原抗體反應(yīng)后是否需要分離結(jié)合的與游離的酶標(biāo)記物而分為均相(homogenous)和異相(heterogenous)兩種類型,實(shí)際上所有的標(biāo)記免疫測(cè)定均可分成這兩類。如以標(biāo)記抗體檢測(cè)標(biāo)本中的抗原為例,按照簡(jiǎn)單的形式是在試劑抗體過(guò)量的情況下進(jìn)行,其反應(yīng)式如下:
Ab*+Ag→Ab*Ag+Ab*
Ab*Ag代表結(jié)合的標(biāo)記物,Ab*為游離的標(biāo)記物。如在抗原反應(yīng)后,先把Ab*Ag與Ab*分離,然后測(cè)定Ab*Ag或Ab*中的標(biāo)記物的量,從而推算出標(biāo)本中的抗原量,這種方法稱為異相法。如在抗原抗體反應(yīng)后Ab*Ag中的標(biāo)記物*失去其特性,例如酶失去其活力,熒光物質(zhì)不顯熒光,則不需要進(jìn)行Ab*Ag與Ab*的分離,可以直接測(cè)定游離的Ab*量,從而推算出標(biāo)本中的Ag含量,這種方法稱為均相法。
在異相法中,抗原和抗體如在液體中反應(yīng),分離游離和結(jié)合的標(biāo)記物的方法有好多種。與放射免疫測(cè)定相類似的液相異相酶免疫技測(cè)定,在某些激素等定量測(cè)定中也有應(yīng)用。但常用的酶免疫測(cè)定法為固相酶免疫測(cè)定。其特點(diǎn)是將抗原或抗體制成固相制劑,這樣在與標(biāo)本中抗體或抗原反應(yīng)后,只需經(jīng)過(guò)固相的洗滌,就可以達(dá)到抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)的分離,大大簡(jiǎn)化了操作步驟。這種被稱為ELISA的檢測(cè)技術(shù)成為目前臨床檢驗(yàn)中應(yīng)用較廣的免疫測(cè)定方法。
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