淋球菌如何進(jìn)行分離培養(yǎng)-2018年檢驗(yàn)技士考試復(fù)習(xí)資料

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　　原理

　　如果標(biāo)本中有淋球菌，則在合適的培養(yǎng)基上經(jīng)培養(yǎng)后可長成菌落。各種細(xì)菌在培養(yǎng)基上生長成的菌落形態(tài)各不相同。根據(jù)菌落的大小、表面高起或扁平、光澤、色素和邊緣的情況等，作為細(xì)菌鑒定的標(biāo)準(zhǔn)。

　　方法

　　1.取材

　　培養(yǎng)要獲得成功，取材的部位和方法要準(zhǔn)確。由男性病人前尿道取材時，應(yīng)該用細(xì)小棉拭子或藻酸鈣拭子或白金耳伸入尿道口2cm～4cm，取出的分泌物應(yīng)略帶粘膜。從女病人的宮頸取材時，應(yīng)先用溫水濕潤擴(kuò)陰器(不要用液體石蠟等潤滑油)。應(yīng)將棉拭插入宮頸口1.5cm處，稍轉(zhuǎn)動并停留10s～30s，讓棉拭充分吸附分泌物。從直腸取材時，應(yīng)將棉拭插入肛門2.5cm以上，如果棉拭碰到糞便，應(yīng)換一個棉拭重取。檢查淋菌性咽炎時，應(yīng)從扁桃體及扁桃體窩取材。為了提高陽性率，可同時取二份標(biāo)本進(jìn)行培養(yǎng)。

　　2.培養(yǎng)基

　　由于淋球菌的營養(yǎng)要求較復(fù)雜，所用的培養(yǎng)基中應(yīng)含有動物蛋白及細(xì)菌生長所需的各種因子。目前國內(nèi)常用的是血液瓊脂或巧克力瓊脂。為抑制雜菌，在培養(yǎng)基中可加入少量抗菌物質(zhì)如多粘菌素B(25g/ml)和萬古霉素(3.3g/ml)等。所用血液如羊血、兔血和人血均可，濃度為8%～10%.但避免血液中加入抗凝劑等藥物。培養(yǎng)基的pH值以7.4為好。目前國外常用的培養(yǎng)基有Thayer-Martin(T-M)培養(yǎng)基、NewYork City(NYC)培養(yǎng)基和Martin-Lewis(ML)培養(yǎng)基等。T-M培養(yǎng)基是在GC基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，加入血紅蛋白(1%)、抗生素(萬古霉素3g/ml、粘菌素7.5g/ml和制霉菌素12.5g/ml)和淋球菌增菌劑，使絕大多數(shù)雜菌被抑制而淋球菌菌落長得較大，在乎皿中幾乎呈純培養(yǎng)，從而大大提高了由子宮頸、尿道，尤其是咽和直腸部位分離出淋菌的陽性率。

　　3.培養(yǎng)條件

　　淋球菌對外環(huán)境變化頗為敏感，對寒冷和干燥抵抗力很弱。因此，為了保證培養(yǎng)有足夠的成功率，取材后應(yīng)立即接種，標(biāo)本離體時間越短越好。取材處離實(shí)驗(yàn)室距離較遠(yuǎn)時，應(yīng)將標(biāo)本接種于Smart或Amies運(yùn)送培養(yǎng)基或1%葡萄糖肉浸液中，并注意在運(yùn)送過程中保溫。接種的血平皿應(yīng)先放在37℃溫箱中預(yù)溫。培養(yǎng)的最適溫度為35℃～36℃，超過38.5℃或低于30℃便生長不良。因此，孵育的溫度要恒定。淋球菌為需氧菌，但最初從人體分離時，為促進(jìn)生長，需用5%二氧化碳環(huán)境培養(yǎng)。為保持一定的濕度，可在培養(yǎng)缸中放些浸水棉球。

　　結(jié)果

　　淋球菌在血平皿上經(jīng)24h～48h的培養(yǎng)后，可形成圓形、凸起、濕潤、光滑、半透明或灰白色菌落。邊緣呈花瓣狀，直徑為0.5mm～1.0mm.用白金耳觸之有粘性。如繼續(xù)培養(yǎng)，菌落面積增大，表面變得粗糙，邊緣出現(xiàn)皺縮。若從菌落上取材作涂片，可見到菌的大小及染色的深度有差異，排列也不一致，約有25%的菌為典型的雙球菌，其他75%為單球菌、四聯(lián)形或八疊形。

　　淋球菌在液體培養(yǎng)基中生長于液體表面，或稍有輕度混濁和顆粒沉淀。

　　注意事項(xiàng)

　　1.培養(yǎng)要獲得成功，取材是關(guān)鍵之一。取材的深度一定要夠，因?yàn)榱芮蚓冒l(fā)于柱狀上皮細(xì)胞而不是復(fù)層鱗狀上皮細(xì)胞。男性尿道前端包括舟狀窩都為復(fù)層鱗狀上皮覆蓋，所以要深人到尿道內(nèi)2cm～4cm處，并蘸取少量粘膜，陽性率才高。女性病人取材時，要求將棉拭插入宮頸管，轉(zhuǎn)動并停留10s～30s也是這個道理。有些人只在陰道口取少量分泌物作分離培養(yǎng)，陽性率當(dāng)然會降低，因?yàn)橛猩盍Φ木鷱膶m頸隨分泌物由陰道流出需一定時間，陰道內(nèi)pH值低，又因各種雜菌的作用，到陰道口時淋菌的生活力較低，再加上培養(yǎng)過程中各種因素的影響，培養(yǎng)成功的機(jī)會就會減少。

　　2.對癥狀不典型的男病人取材，最好是在晨起排尿前或排尿后2～3h之后。另外，采樣者應(yīng)熟練掌握前列腺按摩術(shù)，必要時作前列腺按摩取材。

　　3.對女性淋病的檢查主張用淋球菌培養(yǎng)。國內(nèi)目前使用血液瓊脂加入多粘菌素作抑菌劑效果尚可。但蛋白胨最好用進(jìn)口的(Oxoid公司產(chǎn)品或日本產(chǎn)或Polypepton等)，并用肉浸液加酵母浸膏等為好。

　　4.國內(nèi)目前使用的血液瓊脂或巧克力瓊脂中加人多粘菌素和萬古霉素以分別抑制革蘭陰性和革蘭陽性雜菌。但由于部分淋球菌(某些地區(qū)可高達(dá)5%)對萬古霉素也敏感，因此，最好不用萬古霉素。

　　5.淋球菌在血平板上培養(yǎng)24h，雖能見到菌落，但個兒很小，難以辨認(rèn)其特點(diǎn)。24h～36h，菌落迅速長大。所以觀看菌落特征最好在36h左右。超過36h，菌落特征也會有較大的改變。

　　臨床意義

　　淋球菌培養(yǎng)用作診斷和某些特殊目的。培養(yǎng)法對男性及女性標(biāo)本都是適用的，是世界衛(wèi)生組織推薦的篩查淋病病人的唯一方法，也是診斷淋病的金標(biāo)準(zhǔn)方法。

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