2016年執(zhí)業(yè)西藥師考試藥物分析輔導(dǎo)之肝素生物檢定法
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人力資源社會(huì)保障部辦公廳公布2016年執(zhí)業(yè)藥師考試時(shí)間為2016年10月15日至16日。2016年執(zhí)業(yè)藥師考試大綱暫未公布,為方便大家備考,環(huán)球網(wǎng)校醫(yī)學(xué)考試網(wǎng)提供2016年執(zhí)業(yè)西藥師考試藥物分析輔導(dǎo)之肝素生物檢定法,希望對(duì)大家有幫助。
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本法系比較肝素標(biāo)準(zhǔn)品(S)與供試品(T)延長新鮮兔血或兔、豬血漿凝結(jié)時(shí)間的作用,以測(cè)定供試品的效價(jià)。
標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制(環(huán)球網(wǎng)校醫(yī)學(xué)考試網(wǎng)提供2016年執(zhí)業(yè)西藥師考試藥物分析輔導(dǎo)之肝素生物檢定法)
精密稱取肝素標(biāo)準(zhǔn)品適量,按標(biāo)示效價(jià)加滅菌水溶解使成每1ml中含100單位的溶液,分裝于適宜的容器內(nèi),4~8℃貯存,如無沉淀析出,可在3個(gè)月內(nèi)使用。
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液的配制
試驗(yàn)當(dāng)日,精密量取標(biāo)準(zhǔn)品溶液,按高、中、低劑量組(ds<[3]>、ds<[2]>、ds<[1]>) 用 0.9%氯化鈉溶液配成三種濃度的稀釋液,相鄰兩濃度的比值(r)應(yīng)相等。調(diào)節(jié)劑量使低劑量組各管的平均凝結(jié)時(shí)間較不加肝素對(duì)照管組明顯延長。高劑量組各管的平均凝結(jié)時(shí)間,用新鮮兔血者,以不超過60分鐘為宜,其稀釋液一般可配成每1ml中含肝素2~5單位,r為1:0.7左右;用血漿者,以不超過30分鐘為宜,其稀釋液一般可配成每1ml中含肝素0.5~1.5單位,r為1∶0.85左右。
供試品溶液與稀釋液的配制
按供試品的標(biāo)示量或估計(jì)效價(jià)(A<[T]>),照標(biāo)準(zhǔn)品溶液與稀釋液的配制法配成高、中、低(dT<[3]>、 dT<[2]>、 dT<[1]>)三種濃度的稀釋液。相鄰兩濃度之比值(r)應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)品相等,供試品與標(biāo)準(zhǔn)品各劑量組的凝結(jié)時(shí)間應(yīng)相近。
血漿的制備
迅速收集兔或豬血置預(yù)先放有8%枸櫞酸鈉溶液的容器中,枸櫞酸鈉溶液與血液容積之比為1:19,邊收集邊輕輕振搖,混勻,迅速離心約20分鐘 (離心力不超過1500×g為宜,g為重力常數(shù))。立即分出血漿,分成若干份分裝于適宜容器內(nèi),低溫凍結(jié)貯存。臨用時(shí)置37±0.5℃水浴中融化,用兩層紗布或快速濾紙過濾,使用過程中在4~8℃放置。
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檢定法
(1)新鮮兔血
取管徑均勻(0.8×3.8cm或1.0×7.5cm)、清潔干燥的小試管若干支,每管加入一種濃度的標(biāo)準(zhǔn)品或供試品稀釋液0.1ml,每種濃度不得少于3管,各濃度的試管支數(shù)相等。取剛抽出的兔血適量,分別注入小試管內(nèi),每管0.9ml,立即混勻,避免產(chǎn)生氣泡,并開始計(jì)算時(shí)間。將小試管置 37±0.5℃恒溫水浴中,(環(huán)球網(wǎng)校醫(yī)學(xué)考試網(wǎng)提供2016年執(zhí)業(yè)西藥師考試藥物分析輔導(dǎo)之肝素生物檢定法)從動(dòng)物采血時(shí)起至小試管放入恒溫水浴的時(shí)間不得超過 3分鐘,注意觀察并記錄各管的凝結(jié)時(shí)間。
(2)血漿
取上述規(guī)格的小試管若干支,分別加入血漿一定量,置37±0.5℃恒溫水浴中預(yù)熱5~10分鐘后,依次每管加入一種濃度的標(biāo)準(zhǔn)品或供試品稀釋液及1%氯化鈣溶液(每種濃度不得少于3管,各濃度的試管支數(shù)相等),血漿、肝素稀釋液和氯化鈣溶液的加入量分別為0.5、0.4和0.1ml(或0.8、 0.1和0.1ml),加入氯化鈣溶液后,立即混勻,避免產(chǎn)生氣泡,并開始計(jì)算時(shí)間,注意觀察并記錄各管凝結(jié)時(shí)間。將各管凝結(jié)時(shí)間換算成對(duì)數(shù),照生物檢定統(tǒng)計(jì)法(附錄ⅩⅣ)中的量反應(yīng)平行線測(cè)定法計(jì)算效價(jià)及實(shí)驗(yàn)誤差。
檢定法(1)的可信限率(FL%)不得大于10%。
檢定法(2)的可信限率(FL%)不得大于5%。
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